High Throughput Preparation of Crystallization Screening Pool Solution   

材料与试剂

1. 96孔晶体板 (Swissci, catalog number: 3W96TUVP)
2. Crystal Screen^TM试剂盒 (Hampton Research, catalog number: HR2-110)
3. Crystal Screen 2^TM试剂盒 (Hampton Research, catalog number: HR2-112)
4. Additive Screen试剂盒 (Hampton Research, catalog number: HR2-428)
   

仪器设备

1. 全自动液体处理工作站 (Tecan, model: Freedom EVO)
2. 自动封膜机 (BRANDEL, model: RS-232)
   

实验步骤

1. 晶体板的准备工作：
   将220块晶体板放置在舱中，从位置1开始，从上到下开始放置，和标记编号以及日期，如图1所示。
   
   
   图1. 220块晶体板放置舱
   
   
2. 清洗用的纯水的准备工作：
   在清洗用水的桶中加满水，并将废液桶中的水倒空。
3. 自动封膜机的准备工作：
   将封膜机上的胶带更换一卷新的，以备封膜使用。
4. 试剂盒的准备工作：
   将Crystal Screen^TM试剂盒和Crystal Screen 2^TM试剂盒的前1-48个条件按照顺序横着依次摆放到每行12道的10 ml管槽中，这样96个条件正好排放8行。
5. 开始分装实验：
   将仪器开关和封膜机开关打开，将控制软件打开，输入用户名Admin和密码tecan2021，打开Selection界面，选择分装程序：220Swissci_Plate96_3，如图2所示，点击绿色三角形箭头开始运行程序。接着会打开Runtime Controller界面，继续点击RUN开始分装，如图3所示。
   程序是之前编辑好的，具体编辑的方法可以相关的说明书。
6. 仪器初始化过程：
   在运行程序之前仪器需要进行初始化，这一步是自动运行的，不需要进行操作，如图4和图5所示。
   
   
   图2. 选择分装程序的Selection界面
   
   
   图3. 运行之前的Runtime Controller界面
   
   
   图4. 仪器开始初始化界面
   
   
   图5. 仪器初始化过程界面
   
   
7. 继续分装实验：
   初始化之后，会自动跳到入程序运行的界面，如图6所示。接着会进入Set Variable界面，需要设置板子数量和分装的条件数量以及每个分装的体积，由于此次分装试剂盒的每个条件剩下的体积大概5 ml，所用的96孔晶体板的池液孔中大概需要加的体积是42微升，仪器进行分装的板位区可以放置12块板，所以我们板子数量设置为108块，如图7-9所示。接着仪器开始运行分装96个条件的池液到108块晶体板的池液孔中。程序是分装220块晶体板的，220板以内都可以，不能超过220块。
   具体流程为：仪器的机械手臂先将舱中的晶体板从位置1从上到下取12块，依次放置在板位区，然后开始清洗8道加样钢针3遍，接着从提前摆放好的试剂盒10 ml管的第一列开始吸取42微升体积，加入到晶体板的第一列的池液孔中，依次加12列后，机械手臂将12块板依次放入到自动封膜机中进行封膜，然后在将板子放置回舱中，这就完成了第一批12块晶体板的分装；后面仪器重复上面的流程进行后面一批12块的板的分装，一共完成9次，就实现了108块晶体板的分装实验。
   
   
   图6. 运行之中的Runtime Controller界面
   
   
   图7. 设置板子数量的界面
   
   
   图8. 设置分装条件数量的界面
   
   
   图9. 设置分装体积的界面
   
   
8. 结束实验：
   实验结束后，分装好的108块晶体板已经封好膜放置回舱中，此时将舱门打开取出晶体板放置到4度恒温间中保存，用于后续的蛋白质晶体筛选实验。
   

失败经验

1. 放置晶体板时，需要注意到板的方向，需要将第一列朝向舱门的方向放置，否则会导致加样的时候撞针和无法加样。
2. 在分装之前，需要注意分装的池液体积，计算一下能够分装的板数，否则会导致后面板子分装不到足够的池液，浪费晶体板。
   

溶液配方

1. Crystal ScreenTM和Crystal Screen 2TM试剂盒以及Additive Screen试剂盒：均是商业购买，开封后放置于4度恒温间储存，用于分装实验。

致谢

本文得到清华大学国家蛋白质研究技术中心的资助。