摘要:短链脂肪酸 (SCFA) 是指6个碳以下的有机脂肪酸,猪等单胃动物肠道中的SCFA主要由微生物发酵碳水化合物产生,包括乙酸、丙酸、丁酸、异戊酸、异丁酸等及其盐类。其中,乙酸、丙酸、丁酸约占SCFA总量的85%。不同种类SCFA具有不同的代谢特征,其含量及组成变化与宿主肠道微生物群落结构的变化直接相关。肠道细菌产生的SCFA不仅是宿主肠上皮细胞的主要能源,也通过血液循环参与宿主的各项生理代谢过程。因此,测定食糜和血清中的SCFA含量,对以猪为代表的单胃动物肠道健康相关的研究有重要意义。本实验将食糜和血清样品经过偏磷酸预处理及色谱甲醇稀释后,用毛细管气相色谱法测定,并用内标法计算各SCFA的组成及含量。在实验色谱条件下,各组分有效分离,单个食糜和血清样品检测用时分别为5 min和7.5 min,结果稳定,线性良好,且样品重现性和加标回收率满足要求。该实验所需仪器条件容易实现,操作简便、易学易会、快速准确,推荐在猪等单胃动物食糜和血清的SCFA浓度测定中广泛使用。
关键词: SCFA, 食糜, 血清, 气相色谱法
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一、食糜及粪便中挥发性脂肪酸的测定
二、血清中挥发性脂肪酸的测定
注意事项
结果与分析
一、食糜SCFA测定的色谱方法学验证
二、血清SCFA测定方法学验证结果
失败经验
由于本实验采用的是进样针直接进样,在检测血清等成分复杂的样品时容易导致进样口和毛细管柱前端污染,色谱响应值变低。因此,大约测定50个 (取决于色谱柱和样品的洁净度) 样品后,需停止测样,检查进样口和毛细管柱前端,并及时更换衬管,切掉部分毛细管柱前端,老化后重新检测标准品,待响应值恢复即可重新开始检测血清等样品。测定血清SCFA时用标准液膜毛细管柱得到的信号响应值低,分离不理想,误差较大,建议用固定相液膜厚度大于0.5 μm的FFAP柱。FFAP毛细管柱固定相为硝基对苯二酸改性的聚乙二醇,具有强极性,适合做弱酸性的强极性化合物分离。厚液膜固定相有更大的柱容量和更强的保留能力,更适用于低沸点化合物的分离。
溶液配方
致谢
本工作受国家自然科学基金 (31872369、32072743) 和四川农业大学双支计划项目资助,特致感谢!目前已应用本实验方案发表文章20余篇,部分如下:
参考文献
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