细胞核移植(图15)
耳部表面羊毛剪干净,用75%酒精洗涤灭菌,剪0.5 cm2的一小块耳缘组织,置于D-PBS中带回实验室。将耳组织剪碎成约1 mm2大小的组织块, 用吸管将剪碎组织块移入培养瓶中,均匀平铺于培养瓶底部。将培养瓶倒置,放到38.5 °C培养箱内2 h,使组织块牢固地贴附于培养瓶的底面,然后将培养瓶翻转,加入含20%胎牛血清的 DMEM/F12培养液,在培养箱中继续培养,每隔两天更换新鲜培养液。待贴壁生长的细胞汇合度到达85%以上时,用PBS缓冲液将剩余组织块冲洗掉,再用0.25%的胰蛋白酶消化贴壁细胞,一部分继续传代培养,一部分冻存。传代至 3-5 代时作为核移植供体细胞。
图14. 长到80%成纤维细胞在进行核移植前5 d,细胞复苏后接种到4孔板中,培养2-3 d后,待细胞密度大于在80%时用含0.5%胎牛血清的培养液饥饿1-3 d,而后用0.25%的胰酶消化至单个细胞用于核移植。