摘要:树鼩与灵长类动物关系密切,在生物医学研究中比啮齿类动物有更多优势。然而,由于树鼩雌性生殖生物学基本知识如发情周期,体外胚胎培养周期和技术等的缺乏,从而阻碍了树鼩的广泛应用。基因操作方法的缺乏阻碍了树鼩的广泛应用。目前在小鼠和大鼠中精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)能够在体外长时间扩增培养,并且进行基因编辑。在这里,我们描述了一种分离、培养体系,能够进行树鼩精原干细胞(tree shrew spermatogonial stem cells,TS-SSCs)的长期体外扩增,并保持其干细胞的特性。在我们的研究中,我们使用THY1(CD90)抗体流式分选或磁珠分选、或者差异贴壁的方式来富集TS-SSCs。在原代培养过程中,培养基中添加一定浓度的wnt3a可以提高SSCs的存活率。使用树鼩支持细胞(tree shrew sertoli cells,TS-STO)作为饲养层对于TS-SSCs增殖是必要的。将TS-SSCs与基因编辑方法结合起来的培养系统的发展,为对树鼩进行精确的基因操作铺平了道路。
关键词: 树鼩, 精原干细胞, 分离, 细胞培养
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一、树鼩睾丸组织的消化
二、树鼩精原干细胞的富集培养
针对精原干细胞的富集实验,主要包括以下三种方式,可根据具体情况选择使用。
结果与分析
图1. 树鼩精原干细胞系的建立在建系培养过程中,P2或P3时应该出现如图1中箭头所示的葡萄样集落,之后的培养注意细胞密度即可。
溶液配方
其余试剂按照试剂说明书进行配制及储存。
致谢
相关工作得到了中国科学院(XDB13000000 和XDA01010203)、云南省(2015HA038)、NSFC-云南联合基金项目(U1702284)以及昆明动物所“135”项目资助。实验方案中提到的树鼩精原干细胞分离建系培养方法由李朝晖和班文赞共同建立(班文赞,2016)。相关内容2017年发表于《Cell Research》上(Li et al.,2017)。
参考文献
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