摘要:细胞核质分离后抽提RNA能够高效、特异地得到细胞核和细胞质中的RNA,是研究RNA出核及降解相关问题时常用的实验方法。由于细胞质膜和核膜中胆固醇含量的不同,核膜比质膜更致密,所以针对两层膜设计能破坏质膜但不破坏核膜的裂解液,就可以实现细胞核质分离。TRIzol中含有苯酚、异硫氰酸胍等物质,能从细胞组织中抽提RNA的同时保持RNA的完整性。此方法相较于其他核质分离方法具有用时少、操作简便、对样品需求量较少等优势。通过此方法获得的RNA可用于RT-PCR、RNA测序等实验,研究在不同实验条件下RNA在细胞核和胞质中的定位以及丰度变化。
关键词: 细胞核, 细胞质, RNA, 抽提
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
一、细胞核与细胞质分离
溶液配方
致谢
感谢中国科学院分子细胞科学卓越创新中心程红课题组的全体成员的建议和帮助。该研究受到国家自然科学基金 (31770880,31800686) 的支持。本文实验方案由程红课题组的王可博士参考优化自2007年发表在Science上名为"A hexanucleotide element directs microRNA nuclear import"的文章。
参考文献
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