摘要:免疫荧光染色是一种重要的研究目的蛋白在组织和细胞中定位的手段。其原理是通过在固定的组织和细胞中加入特异识别目的蛋白并带有特定荧光标记的抗体,使抗体和目的蛋白结合,通过对抗体的荧光信号成像分析,得到目的蛋白在组织和细胞中的位置。免疫荧光染色不仅可以标记果蝇体内的目的蛋白的组织定位,也可以在体外培养的细胞中标记目的蛋白在单个细胞中的亚细胞定位。果蝇的Schneider 2 (S2) 细胞系是最常用的一种果蝇细胞系,本方案以S2细胞系为例,介绍在果蝇体外培养细胞系统中的免疫荧光染色方法。
关键词: 果蝇, S2细胞, 免疫荧光染色
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
我们在S2细胞中转染了pUAST-V5-misshapen以及pActin-Gal4质粒各0.4 μg,并在转染2天后收集细胞做免疫荧光染色,使用刀豆蛋白A处理玻片。使用一抗mouse anti-V5 (Invitrogen) 浓度1:2,000。使用二抗Goat anti-mouse 488 (Thermo Fisher Scientific Alexa Fluor® Plus 488) 浓度1:400。结果显示Misshapen蛋白主要分布在S2细胞的细胞质中 (图1)。图1. V5-misshapen过表达细胞染色
注意事项
溶液配方
致谢
本实验室的工作得到细胞增殖与分化重点教育部重点实验室、膜生物学国家重点实验室、生命科学联合中心、国家自然科学基金和科学技术部的资金支持。本实验方案改编自本实验室的发表文章Du等 (2016) 和Liu等 (2016)。
参考文献
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