摘要:果蝇发育主要有卵、幼虫、蛹和成虫几个发育阶段,主要讲述如何快速有效地收集这几个不同时期样本。
关键词: 果蝇, 发育时期, 样品收集
材料与试剂
- 1.5 ml离心管
- 博格利诺勾线笔
- Kimwipes纸巾 (Kimberly-Clark Worldwide, catalog number: 34155)
- 100 μm细胞滤网筛 (Corning Incorporated-Life Sciences, catalog number: 352360)
- 高糖型马利活性干酵母 (英联马利(北京)食品销售有限公司)
- 苹果汁
- 84消毒液
- PBS
- CO2
- 琼脂
- 食物平板 (见溶液配方)
- 酵母泥 (见溶液配方)
- 苹果汁板 (见溶液配方)
仪器设备
- 果蝇培养瓶 (Genesee Scientific, catalog number: 32-130)
- 果蝇胚胎收集笼 (Genesee Scientific, catalog number: 59-101)
- 果蝇培养箱 (Percival Scientific, model: DR-41VL)
- 离心机 (Eppendorf)
- 微波炉
实验步骤
一、果蝇卵的收集
- 果蝇培养条件:温度25 °C;湿度60%。准备4个果蝇培养瓶,每个培养瓶里各放50只雄果蝇和50只雌果蝇。
- 3天后,倒掉果蝇,每个培养瓶放一张kimwipes纸巾,增加蛹依附的空间,以收到更多的成虫。
- 第10天开始下一代成虫开始出,收集3天的成虫,并全部 (约1,200只果蝇) 集中放到果蝇胚胎收集笼中养2天,使用直径为10 cm的食物平板。为减少果蝇的损耗,把胚胎收集笼倒置,让食物平板在上,并放入2张kimwipes纸巾以保持环境干燥。
- 第3天更换新鲜的食物平板,并在食物平板上抹适量酵母,放入果蝇胚胎收集笼中适应一天,胚胎收集笼倒置,食物平板在上,更换2张新的kimwipes纸巾。
- 将苹果汁板上抹上酵母泥,苹果汁板在下面,每间隔1 h更换一次苹果汁板,换2~3次苹果汁板之后观察预产情况,卵数量足够即可开始收集。
- 用博格利诺勾线笔将苹果汁板上的卵收集到100 μm的细胞滤网筛中。
- 用自来水冲洗一遍。
注:自来水的流速不能太大,并且避免直接冲洗卵,减少对卵的伤害。 - 用干纸巾吸干水分后,置于50% 84消毒液中漂洗1 min。
注:50% 84消毒液处理的作用是去掉外层卵膜 (outer chorion)。 - 自来水冲洗1 min,注意水的流速不要太快。
- 洗干净的卵即可用于下一步实验。
注:根据预期收集的胚胎发育时期,可以调整产卵笼下苹果汁板的更换间隙,并放置一定时间再收集胚胎。如:产卵笼下苹果汁板放置4小时使成虫产卵,取出后把平板在培养箱中放置12小时再收集,则得到的胚胎发育时期为12~16小时。
二、果蝇幼虫、蛹及成虫的收集
- 准备3~5天的150只处女果蝇和200只雄果蝇,平均分到10个管里。
注:食物上添加酵母,促进果蝇产卵,25 °C,60%湿度保证最佳培养条件。 - 每间隔4 h将果蝇转移至新的食物管中开始新的一轮实验计时,以4 h为一个时间段,收集对应时间段的幼虫。
- 24 h收第1龄的幼虫,48 h~72 h收第2龄的幼虫76 h~80 h收第3龄早期幼虫,96 h收第3龄中期幼虫,116 h收第3龄晚期幼虫,6天收早期的蛹,7天收中期的蛹,8天收晚期的蛹,9天收隐成虫,10天收成虫。每个时间点的果蝇参考下图1。
图1. 不同发育时期果蝇形态
- 收集不同时期的幼虫
注:收集一龄幼虫也可以用收集胚胎的方法。洗净即可,不必用84消毒液处理。
- 收集不同时期的蛹
- 收集成虫
将果蝇用CO2麻醉后收集即可。
结果与分析
如果收到的卵不够或者很少,可以从两个方面是找原因:
- 果蝇是否都是3~7天的果蝇。
- 果蝇的密度一定要合适,太少肯定产卵少,太多果蝇状态很差,会粘死很多,也会导致卵少。
溶液配方
- 食物平板
在10 cm平板中倒入1/2高度的果蝇食物,冷却即可 - 酵母泥
5 g高糖型马利活性干酵母中加入8 ml双蒸水,搅拌混匀 - 苹果汁板
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