摘要:传统药物筛选大都是在分子和细胞水平进行,具有快速、灵敏度高、成本低等优点,但也有明显缺点,例如不能真实反应化合物在复杂生理环境下的生物学活性及安全性等。因此,在生理或病理水平下进行活体药物筛选的重要性与优势日益突显。斑马鱼作为一种新兴的脊椎动物模式生物,具有众多优势,如饲养成本低、产卵多、胚胎体外发育、早期透明、组织器官发育及分子调控机制与哺乳动物高度保守等(Haffter et al.,1996; Howe et al.,2013)。此外,许多人类疾病模型也已在斑马鱼中成功建立。因此,斑马鱼作为一种比较理想的活体药物筛选模型,将在新药研发中具有广阔的应用前景(MacRae and Peterson, 2015; Rennekamp and Peterson, 2015)。中性粒细胞是固有免疫系统中的主要效应细胞,在炎症、抗感染和免疫等方面发挥重要作用(Burn et al., 2021)。其功能和数量异常与人类许多重要疾病密切相关,例如中性粒细胞减少症或炎症性肠病等。我们以标记粒细胞的转基因斑马鱼系(Tg(mpx:EGFP))为模型,在胚胎发育过程中加入不同小分子化合物处理,通过活体-高通量、高内涵图像分析系统(Opera Phenix)来寻找影响中性粒细胞增殖、分化或凋亡的小分子化合物。
关键词: 斑马鱼, 高通量药物筛选, 中性粒细胞
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
使用Opera Phenix机器完成每块96孔板扫描仅需3-5 min,大大缩短了筛选时间。并且,扫描结果通过Harmony4.1软件分析,能较真实反应实际情况。如图1所示,软件能够计算每孔胚胎中EGFP+细胞数量,荧光强度等参数,为化合物的作用效果提供参考。图1. Opera Phenix机器扫描结果
注意事项
溶液配方
致谢
感谢国家自然科学基金(31371479)和广慈卓越青年培养计划对本工作的支持。
参考文献
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