摘要:在探究益生菌体外益生特性时,往往有多种研究方法可以采用,抑菌圈实验可用于检测对多种病原菌的拮抗性;药敏实验可检测对多种抗生素的敏感性,经常在实验初期时对益生菌的筛选起到评判作用。本文结合了本实验室抑菌圈实验和药敏实验的经验,介绍了抑菌圈和药敏实验研究益生菌拮抗病原菌和抗生素敏感性的方法,并介绍了实验前待测菌和受试菌的培养以及菌液的制备等方法。
关键词: 益生菌, 病原菌, 抗生素, 抑菌圈实验, 药敏实验
材料与试剂
- 抗菌药物药敏纸片(杭州微生物,成套30种)
- 胰蛋白胨(生工,A505250)
- 酵母粉(生工,A515245 酵母提取物)
- 氯化钠(上海沪试)
- 琼脂(生工,A505255)
- LB肉汤培养基(生工,A507002)
- MRS肉汤培养基(OXOID,CM1175)
- 菌液
- 单蒸水
- 培养基(见溶液配方)
仪器设备
- 90 mm塑料培养皿(biosharp BS-90-D)
- 50 ml离心管(海门市雷博尔实验器材有限公司)
- 纯水制备仪(ELGA PURELAB系列)
- 移液器(Eppendorf Research plus 单道固定量程移液器)
- 吸头(生工,F601227)
- 烘箱(天津泰斯特101-0AB型电热鼓风干燥箱)
- 厌氧培养箱(Whitley DG250)
- 超净工作台(天津泰斯特,CJ-2D)
- 10 μl接种环(生工,F619312)
- 高压灭菌锅(上海庆开,GI54TW)
- 冰箱(美菱)
- 恒温混匀仪(Eppendorf ThermoMixer C)
- 微波炉(美的)
- 锥形瓶
- 量筒
- 玻璃棒
- 镊子
- 不锈钢小管
- 牛津杯
- 直尺或游标卡尺
- 酒精灯
软件
- Microsoft Office
- HemI 1.0
实验步骤
一、菌液的制备
- 待测菌的活化及发酵上清液的制备
- 受试病原菌的培养及菌悬液的制备
二、检测对多种病原菌的拮抗性
- 琼脂扩散牛津杯法
- 双层琼脂扩散打法
三、检测对多种抗生素的敏感性
- 在离心管中加入待测菌液2.5 μl,并倒入40 ml冷却至约40 ℃但未凝固的LB固体培养基,上下颠倒混匀后倒入培养皿中,待培养基凝固。
- 在酒精灯火焰上灼烧镊子灭菌,稍微冷却后取药敏圆片贴于培养基表面。用镊子轻按几下药敏片使药敏圆片与培养基紧密相贴。为了准确的观察结果,要求将药敏片有规律的放置,90 mm直径的平板适宜贴6张药敏纸片,并且对每种药敏片所代表的抗生素进行记录。(杨立等,2017)
- 将平板倒置放于37 ℃恒温箱内,培养24 h,量取抑菌圈直径。
结果与分析
- 抑菌圈实验结果分析
- 药敏实验结果分析
溶液配方
- LB固体培养基(1)1,000 ml
- LB固体培养基(2)1,000 ml
- MRS固体培养基 1,000 ml
致谢
感谢国家自然科学基金青年项目(31700004),全国大学生平台创新和创业培训项目(S202010542046),湖南省科技厅创新人才与平台计划(2019RS5001),湖南创新型省份建设专项经费(2019RS3022)的支持。
参考文献
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- Chen, T. H.,Wang, L. L., Li, Q. X., Long, Y. J., Lin, Y. M.,Yin, J., Zeng, Y., Huang, L., Yao, T. Y., Abbasi M. N., Yang, H. S.,Wang, Q. Y., Tang, C. J., Khan, T . A., Liu, Q. Y., Yin, J., Tu, Q., Yin, Y. L. (2020). Functional probiotics of lactic acid bacteria from Hu sheep milk. BMC microbiology,20, 228.
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Q&A
Copyright: © 2021 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式:齐益宁, 陈雨薇, 李琴心, 尹佳. (2021). 抑菌圈和药敏实验研究益生菌拮抗病原菌和抗生素敏感性的方法. // 微生物组实验手册.
Bio-101: e2003727. DOI:
10.21769/BioProtoc.2003727.
How to cite: Qi Y. N., Chen, Y. W., Li, Q. X. and Yin, J. (2021). Antibacterial Circle and Drug Susceptibility Test Research Probiotic Antagonism of Pathogenic Bacteria and Antibiotic Sensitivity Method. // Microbiome Protocols eBook.
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10.21769/BioProtoc.2003727.