摘要:短链脂肪酸 (Short-chain fatty acids, SCFAs) 是肠道菌群的重要代谢产物,主要包括乙酸、丙酸和丁酸,对宿主的许多生理代谢过程具有有益的调节作用。由于以往检测方法存在操作耗时长、所需样本量大、机器批次效应偏差、前处理误差大的缺点,无法对样本中的SCFAs进行准确定量。本文通过添加内标脂肪酸的方法,可以在1.5小时内完成粪便样本的前处理手动操作,并且只需0.03 g的粪便样本,完成对十种SCFAs的定量检测。本方法可拓展至其他生物样品类型 (器官组织、微生物培养液等),为肠道菌群代谢相关研究提供技术参考。
关键词: 短链脂肪酸, 气相色谱-质谱技术, 肠道菌群
材料与试剂
材料:
仪器设备
实验步骤
一、前期准备工作 按照终浓度配置以下溶液:
结果与分析
下图展示了SIM模式下800 μM SCFAs标准品溶液和小鼠粪便样品的检测色谱图 (图1)。
图1. SCFAs标准品和小鼠粪便样品在SIM检测模式下的色谱图
致谢
本文得到青年千人人才计划资助。
参考文献
If you have any questions/comments about this protocol, you are highly recommended to post here. We will invite the authors of this protocol as well as some of its users to address your questions/comments. To make it easier for them to help you, you are encouraged to post your data including images for the troubleshooting.
你好,内标溶液在前期准备工作中已经制备好,用超纯水溶至终浓度为10ug/ml。这一步是不加其他SCFA标准品的,只需要加内标溶液。
谢谢,那如果您做标准曲线的话,大概加多少ul?操作步骤都是一样的吗?只是把小鼠粪便换成了标准品?
你好,标准曲线是用含有相同浓度内标的不同浓度梯度的标准品做检测建立,和粪便样品操作步骤相一致,你只需要把标准品等同于含有内标的粪便提取上清,进行相同后续处理即可。
老师您好,我尝试了您的方法,其他都还可以,就是乙酸的峰和溶剂峰(BSTFA)混在一起了。而且BSTFA峰面积太高了,但掐掉前面又怕乙酸峰也没了。可能柱子不同,出峰时间不太一样
你好,升温程序是否调到一致?是否用的SIM模式?我之前没有遇到你说的情况,可以尝试在SIM模式下,降低升温速率
一致的,好谢谢的,我尝试一下sim模式,一直用的scan全扫描。