摘要:精原干细胞在适当的体外培养条件下可进行自我更新和增殖,并可进行基因修饰,移植到受体动物睾丸曲细精管后可以存活,并通过再生持续产生精子。因此,精原干细胞是一种极富潜力的转基因细胞载体。我们前期在树鼩精原干细胞中成功建立了高效稳定的转基因操作技术体系,并产生了国际首例转基因树鼩 1。本实验方案对树鼩精原干细胞转基因操作的具体流程进行了描述,得到的转基因精原干细胞株,可直接移植到受体树鼩睾丸中用于生产转基因树鼩后代。
关键词: 树鼩, 精原干细胞, 转基因
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
经验总结
流式分选过程容易导致精原干细胞污染,因此需要多加注意。也可用挑取单克隆的方式富集转基因阳性的精原干细胞。
溶液配方
致谢
相关工作得到了中国科学院(XDB13000000和XDA01010203)、云南省 (2015HA038)、NSFC-云南联合基金项目(U1702284)以及昆明动物所“135”项目资助。利用本研究相似的方案,我们建立了GFP转基因树鼩,相关工作于2017年发表于《Cell Research》(Li et al., 2017)。前期班文赞、李朝晖等系统探索了不同病毒载体在精原干细胞中的转基因效率,为本实验方案提供了非常有价值的参考(班文赞,2016)。
参考文献
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