摘要:海洋微生物在维持海洋生态系统动态平衡过程中起到重要作用,海洋中微生物数量和群体的变化直接反映了海洋生态环境状况。因此,海洋微生物数量和群体分析在海洋环境监测和海洋生态系统研究中具有重要意义。根据海洋微生物的光散射特性和荧光性质,通过流式细胞仪 (Flow cytometry, FCM) 对其进行数量、大小和形态分析,具有所需样本量少、操作简单、快速和准确性高的特点。
关键词: 海洋微生物, 流式细胞术, 微生物数量
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
结果与分析
通过流式细胞仪对海洋微生物的大小、形态及荧光特性进行检测和分析,可以获得具有特殊生物学特性的海洋微生物。Alle等根据海洋浮游植物的大小和荧光特性,通过流式细胞仪分析、分选,从大西洋中分离得到微藻群 (图1),随后通过宏基因组学分析该微藻群在生物进化和海洋生态系统中的作用 (Cuvelier等,2010)。
图1. Alle等通过流式细胞仪从大西洋中分选得到特定微藻. 根据浮游植物群的前向散射光 (FSC)和叶绿素衍生的红色荧光特征对浮游微生物进行区分,得到特定大小和荧光特性的微藻。图中最下方的最大的一群为原绿球藻群,在其上方的为聚球藻群,最上面荧光最强且最大的为真核微生物,右下方的黑色方框代表0.75 μm的微球 (Cuvelier等,2010) 。
Marie等利用不同类型微藻细胞的大小 (FSC)、细胞内部颗粒复杂程度 (SSC) 和所含有的色素成分差异进行流式分群分析 (Marie 等,2004)。如图2所示,通过FSC、SSC、红色荧光、黄色荧光两两通道组合进行作图,可以将不同大小、不同荧光强度的微藻细胞区分,共区分得到10种不同类型的微藻细胞群 (Marie 等,2004)。
图2. Marie等利用不同类型的微藻所含有的色素成分和细胞大小差异进行流式分群分析 (Marie 等,2004)
失败经验
致谢
本工作的顺利开展得益于国家自然科学基金项目 (资助号:81703555,81773063,U1505225和81273548)、国家重点基础研究发展计划 (973计划)项目 (资助号:2015CB931804)、中国大洋专项课题 (资助号:DY135-2-13)、福建省科技厅平台项目 (资助号:2018N2001)、教育厅平台项目和中国博士后科学基金 (资助号:2017M620268)的经费支持。
参考文献
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