摘要:调节性T细胞 (简称Treg),是一群具有免疫抑制功能的特殊CD4+ T细胞,对维持机体的免疫耐受及免疫稳态至关重要 (Sakaguchi,2004)。虽然Treg细胞都特异性表达转录因子Foxp3,但Treg也不是均一的细胞亚群。依据分化场所和前体细胞的不同,Treg细胞可以分为胸腺来源的tTreg的和外周诱导形成的pTreg,目前主要由Nrp-1和Helios这两个分子来区分tTreg和pTreg (Josefowicz和Rudensky,2009)。此外,依据其活化状态,Treg细胞可以分为CD44loCD62Lhi静息状态的Treg细胞 (简称“cTreg”) 以及CD44hiCD62Llo活化状态的效应Treg细胞 (简称“eTreg”);cTreg高表达归巢受体CD62L以及趋化因子受体CCR7,主要存在于二级淋巴器官;相反,eTreg细胞会下调表达CD62L和CCR7,上调表达活化相关分子如CD44、ICOS、KLRG1、CTLA4、CD69等,主要定居于非淋巴器官组织中 (Smigiel等,2014)。eTreg细胞还可以进一步上调效应T细胞相关的转录因子如T-bet、GATA3、RoRγt以及Bcl6发育成特定的效应Treg细胞如Th1-Treg、Th2-Treg、Th17-Treg以及TFR,促使表达相应的趋化因子受体,来更好的发挥特定的免疫抑制功能 (Josefowicz等,2012;Cretney等,2013)。 Treg细胞的成熟及发育缺陷是造成自身免疫性疾病的重要原因,因此分析其亚群分类对理解免疫稳态控制具有重要的意义 (Dominguez-Villar和Hafler,2018)。在此,依据Treg细胞表达表面及内部分子的差异,主要讲述如何运用流式细胞仪分析Treg细胞主要亚群分类。
关键词: 调节性T细胞 (Treg), 亚群分类, 流式检测
材料与试剂
一、小鼠胸腺、淋巴结单细胞悬液制备相关耗材及试剂
二、流式检测试剂及抗体
仪器设备
实验步骤
一、小鼠胸腺、淋巴结以及脾脏中淋巴细胞的获取
二、细胞流式染色 (涉及荧光蛋白GFP与Foxp3同时染色方法)
三、转录因子T-bet染色方法
结果与分析
溶液配方
致谢
此实验方案主要基于周旭宇研究员之前的研究工作以及其实验室最近发表的文章 (Zhou等,2009;Zhang等,2017;Zhu等,2019)。在此致谢张伟博士、张忠美博士对本实验方案的贡献。本项工作得到了国家自然科学基金项目 (项目编号:31470882,31870911)和国家科技重大专项的资助 (项目编号:2016ZX10004222-007)。
参考文献
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