摘要:本实验通过薄层层析的方法分离果蝇组织中的脂类。
关键词: 果蝇, 薄层层析, 脂类
材料与试剂
- 滤纸
- 铅笔
- 毛细管
- 展开剂:不同的展开剂对脂的分辨率和条带不同,应参考自己的样品和分析需求测试合适的展开剂。
- 碘晶体 (化学纯即可)
仪器设备
- 烘箱
- 层析缸
- 层析板 (TLC silica gel 60 F254 plate) (Merck, catalog number: 1.05729.0001)
- 通风橱
- 含有碘晶体的容器
实验步骤
- 装配层析缸,放入1到2片滤纸,将其紧贴缸壁 (图1)。
- 倒入80~100 ml展开剂 (材料与试剂4) [可以用1) ~ 6)不同展开剂],盖紧层析缸盖,平衡缸内空气30~60分钟。
图1. 层析缸装配实物图
- 使用铅笔在层析板底部2 cm处绘制水平直线,并设计样品点样位置。在距离层析板顶部2 cm处绘制水平直线,作为层析流动相终点处的位置。
- 将层析板放置在70 °C烘箱中干燥至少15分钟。
- 用毛细管吸取含有待分析的脂样品的有机溶液20 μl,在点样位置上样,全完上样后将层析板置于室温或用吹风机干燥。
注:组织脂样品按照参考文献提供的方法提取,最终由氯仿/甲醇 (1:2) 重新溶解。 - 将干燥后的层析板放置到层析缸中。注意不要让展开剂液面超过用铅笔绘制的水平线。
- 当展开剂流动相达到层析板上部绘制的水平线后取出,然后在通风橱内将层析板干燥。
- 将层析板放置到含有碘晶体的容器中染色 (图2),并拍照扫描。
图2. 层析板置放于染色容器示意图
参考文献
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