实验原理:Gateway技术是基于已研究的非常清楚的λ嗜菌体位点特异重组系统 (attB x attP →attL x attR)。BP和LR两个反应就构成了Gateway™技术。BP反应利用一个attB DNA片段或表达克隆和一个attP供体载体之间的重组反应,创建一个入门克隆。LR反应是一个attL入门克隆和一个attR目的载体之间的重组反应。LR反应用来在在平行的反应中转移目的序列到一个或更多个目的载体。Gateway利用了位点特异重组,所以在构建入门载体后,不再需要使用限制性内切酶和连接酶。一旦拥有一个入门克隆,就可以多次使用它,转移目的基因到Gateway改造过的各种表达载体。实验目的:利用Gateway技术构建双元表达载体,主要包括超量表达载体、干涉载体以及启动子活性分析载体等,用来进行转基因功能验证。本实验以构建甜橙基因Cs7g29500的超量表达载体为例。
关键词: Gateway, 载体构建, BP反应, LR反应
材料与试剂
仪器设备
实验步骤
注意事项
溶液配方
参考文献
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