实验原理：水稻器官衰老或在非生物逆境条件下，膜脂发生过氧化作用，丙二醛(malondialdehyde)是其产物之一，通常利用它作为膜脂过氧化指标。MDA在高温及酸性条件下与TBA反应形成有色物，在532 nm波长处有最大吸收值，600 nm波长处有最小吸收值。
实验目的：检测水稻在非生物逆境胁迫前后膜脂的过氧化程度，检测水稻细胞膜对非生物逆境反应的强弱。
关键词: 水稻, 生理指标, 丙二醛, 非生物逆境
材料与试剂
- 冰盒
- 塑料袋
- 1.5 ml、10 ml离心管
- TCA (三氯乙酸)
- TBA (硫代巴比妥酸)
- 10% TCA (见溶液配方)
- 5% TCA (见溶液配方)
- 0.67% TBA (见溶液配方)
仪器设备
- 剪刀
- 研钵
- 100 ml容量瓶
- 天平
- 冷冻离心机
- 电磁炉
- 比色皿及分光光度计(DU640)
实验步骤
- 冰盒取样水稻叶片样品，置于封闭的塑料袋中，带回实验室立即测定。
- 天平称取0.5 g水稻叶片，剪刀剪碎后加5% TCA (见溶液配方) 5 ml，用预冷的研钵置于冰上研磨至匀浆状，倒入10 ml离心管中。
- 在3,000 rpm下冷冻(4 °C)离心10 min，取上清液2 ml至新的10 ml离心管中，向其中加入0.67% TBA (见溶液配方) 2 ml，混合后在100 °C沸水中煮30 min，室温自然冷却后取1.5 ml上清至新1.5 ml离心管中，室温12,000 rpm离心后取上清。
- 用分光光度计分别测定上清液在450 nm、532 nm和600 nm处的吸光度值。并按公式算出MDA浓度，再算出单位鲜重组织中的MDA含量(μmol/g)。
- 结果计算，按公式 C/μmol/L = 6.45 (A532-A600) - 0.56 A450
式中A450、A532、A600分别代表450 nm、532 nm和600 nm波长下的吸光度值。
注意事项
- 检测生理指标的水稻组织质量应该一致，保证较好的实验结果。
- 检测植物生理指标所用试剂，最好现配现用。
- 用分光光度计测定吸光度时应注意分光光度计的测定范围。
溶液配方
- 10% TCA
称取10 g TCA，使用ddH2O溶解，转移至100 ml容量瓶中定容
- 5% TCA
将10%的TCA用ddH2O稀释一倍
- 0.67% TBA
称取0.67g TBA用10%的TCA溶解，转移至100 ml容量瓶中用10% TCA定容
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Q&A
Copyright: © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
引用格式：都浩, 王妮丽, 熊立仲. (2018). 水稻叶片中丙二醛(MDA)含量的测定.
Bio-101: e1010148. DOI:
10.21769/BioProtoc.1010148.
How to cite: Du, H., Wang, N. L. and Xiong, L. Z. (2018). Determination of Malondialdehyde (MDA) Content in Rice Leaves.
Bio-101: e1010148. DOI:
10.21769/BioProtoc.1010148.
