材料和试剂

提示移液器：200，1 ，200，和5个，000 MYU 大号（GILSON公司，目录编号：F167103，F171600，F161571）
10 µl 移液器吸头（GP-LTS-A-10 µL-960 / 10； RAININ，目录号：30389270）
-M 0.5 升微管（BIO-BIK，目录编号：103001）
-M 2 ... 升粉碎管与不锈钢内，盖子（生物医学科学，目录号的：MT020-01HS）
硼硅酸盐玻璃试管：16 x 125 mm和13 x 100 mm（IWAKI，目录号s ：9835-1612，9832-1310）
试管盖：13毫米和16毫米（Fisher Scientific，目录号：14-376-69，14-376-83）
MYU-50 大号GC小瓶中插入带有底部弹簧（岛津GLC，目录号：98058）
M-2.0 大号自动进样器样品瓶（Chromacol ，目录号：2-SV）
用于2.0毫升升样品瓶的隔垫（岛津制作所，目录号：221-41239-91）
上限2.0螺杆-M 大号小瓶（岛津制作所，目录号：228-15653-91）
帽具有闭合螺旋盖对于2.0-M 大号小瓶（Chromacol ，目录号：8-SCS）（用于存储）
老鼠组织
InertSep NH2-盒：200的Mg / 3M的大号（GL科学，目录号：5010-61602）
Supelco 37组分FAME混合物（Sigma-Aldrich，目录号：CRM47885）
顺式-4,10,13,16-二十二碳四烯酸甲酯[DTA（C22：4n-6）FAME]（开曼群岛，目录号：10006866）
顺式-7,10,13,16,19-二十二碳五烯酸甲酯[DPA（C22：5n-3）FAME]（Sigma-Aldrich，目录号：47563-U）
4Z，7Z，10Z，13Z，16Z-二十二碳五烯酸甲酯[DPA（C22：5n-6）FAME]（Nu- Chek Prep，Inc.，目录号：U-102-M）
十三烷酸（C23：0 FA）（Sigma-Aldrich，目录号：T6543）
甲醇（用于高效液相色谱法）（FUJIFILM Wako，目录号：132-06471）
氯仿（保证试剂）（FUJIFILM Wako，目录号：038-02606）
二氯甲烷（保证试剂）（FUJIFILM Wako，目录号：135-02441）
丙酮（保证试剂）（FUJIFILM Wako，目录号：016-00346）（用于GC注射器清洗）
己烷（保证试剂）（FUJIFILM Wako，目录号：085-00416）
2-丙醇（保证试剂）（FUJIFILM Wako，目录号：166-04836）
醋酸（保证试剂）（FUJIFILM Wako，目录号：017-00256）
乙醚（保证试剂）（FUJIFILM Wako，目录号：055-01155）
28％氨溶液（FUJIFILM Wako，目录号：016-03146）
Dulbecco的磷酸盐缓冲盐水（PBS）（10x）（Sigma-Aldrich，目录号：D1408）
超纯水（MilliQ ）
他（> 99.999 vol％）
H 2 （> 99.999体积％）
液氮
脂肪酸甲基化试剂盒（Nacalai Tesque ，目录号：16962-04）
甲基化试剂A

甲基化试剂B

甲基化试剂C

分离试剂

脂肪酸甲酯纯化试剂盒（Nacalai Tesque ，目录号：16961-14）
调理溶液

洗涤液

洗脱液

SPE色谱柱

氯仿：2-丙醇（2：1，v：v）（请参阅食谱）
含2％乙酸的乙醚溶液（请参见配方）
甲醇中的氨为2.8％（请参阅食谱）
PBS（请参阅食谱）
C23：0 FA（5 mg / ml的储备液和1 mg / ml的工作溶液）（请参见配方）
标准FAME混合液（连续稀释）（请参阅配方）
DTA（C22：4n-6）FAME（〜1 mg / ml 储备溶液）（请参阅食谱）
DPA（C22：5n-6）FAME（〜10 mg / ml和〜1 mg / ml 储备溶液）（请参见食谱）
DPA（C22：5n-3）FAME（〜1 mg / ml 储备溶液）（请参阅食谱）
DTA和DPA FAME组合（请参阅食谱）

配套设备

Pipetman （Gilson ，型号：P5000，P1000和P200 ）。
玻璃刻度量筒
Pipet-Lite LTS移液器L-10XLS +（RAININ，目录号：17014388）
钳子
涡旋混合器（科学工业，目录号：G-560）
真空蒸发器（Sakuma，货号：EC-95C3T）
水浴（TAITEC，型号：温度室热敏电阻SD）（用于37 °C 孵育）
带有旋转转子的离心机（日立，型号：Himac CF8DL）
CAPSULEFUGE微量离心机（TOMY，目录号：PMC-060）
配备有火焰离子检测器（FID）的气相色谱（GC）系统（岛津制作所，型号：GC2010 Plus）
FAMEWAX GC毛细管柱，30 mx 0.25 mm;内径0.25 µm（Restek ，目录号：12497）
自动低温粉碎机（Tokken ，Inc.，型号：AUTOMILL TK-AM5）
不锈钢破碎机（Tokken ，Inc.，目录号：SK-100-DLC10）
旋转器（TAITEC，型号：RT-50）

软体类

GC 解决方案软件，版本2.44（Shimadzu）
微软Excel

程序

该协议中描述的整个实验工作流程如图1所示。当仅确定总FA时，将遵循蓝色箭头，而当确定中性脂质和/或磷脂级分中的FA时，将遵循绿色箭头。

D：\重新格式化\ 2020-3-2 \ 1902850--1373吉田佳广249185 \图jpg \图1.jpg

图1.通过GC-FID对组织样品中的FA进行定量的工作流程。将冷冻的组织进行低温粉碎。当仅需要对FA进行定量分析时，将经过粉碎的组织直接进行衍生化程序（蓝色路径）。 -脂质（NL）和磷脂（PL）馏分以及总脂质（总），使用Bligh-Dyer方法从粉碎的组织中提取总脂质，通过固相萃取进行分离，然后衍生化（绿色路线））。

组织粉碎
冷冻小鼠组织放置（约50分mg以下）和一个不锈钢的破碎机分为A 2.0-M 大号制粉管有不锈钢内盖，并冷却在液氮中。
管中的使用摇一个，自动低温粉碎机（900 - 。1500转，20秒）的重复几次的直至完全粉碎。
只有总FA如果分析的能力，不断P Rocedure D.当磷脂和中性脂质成分还需要进行分析，不断P Rocedure B.

从粉状组织中提取Blig h -Dyer总脂质（Bligh and Dyer，1959 ）。
800添加MYU 大号甲醇到管含有粉碎的组织和破碎机。
在4 °C 轻轻旋转1 h。
用镊子从管子中取出破碎机。
将管内容物倒出到玻璃试管（16×125毫米）含有，1米升PBS中。
串行收回所有组织，洗净粉碎管1.0M的大号甲醇，1.25M的大号氯仿和0.7M的大号甲醇到玻璃试管。
注：玻璃试管将包含粉碎组织，2.5M 大号甲醇，1.25M的大号氯仿和1M 大号中PBS。

以最大速度涡旋2分钟。
将玻璃试管在室温下放置10分钟。
1.25M，添加大号氯仿的玻璃试管，涡旋2分钟。
向玻璃试管中加入1.25 ml PBS，涡旋2分钟。
使用旋转转子在室温下将玻璃试管以1,000 xg离心10分钟。
将下部（有机）相转移到新的玻璃试管（16 x 125 mm）中。
全脂质回收率为，添加1.0M的大号剩余的水相，涡旋氯仿到2分钟，离心10分钟，收集低级阶段，并结合它与第一提取物。
在玻璃测试管蒸发含有萃取物至干燥使用真空蒸发器中。该步骤通常需要约1 H适用于〜50 mg组织从P Rocedure A，虽然这依赖于组织类型和蒸发器性能。
1M的添加大号氯仿和漩涡，直至提取物溶解。
要继续P Rocedure C.

通过固相萃取制备中性脂质和磷脂级分
除去甲0.4-M 大号等分试样从1-M 大号制备总脂提取物（氯仿溶液）P Rocedure乙并将其传输到标有“总脂质”一种新的玻璃试管（13×100mm）上。对于定量准确，移液器应预先用氯仿润湿。
-Equilibrate的，预InertSep NH 2柱（200毫克/3米升）与9米升（3×3米升己烷）。
将新的玻璃试管（16 x 125 mm）标记在试管底部的“中性脂质”。
使用预先润湿的移液器，负载0.4M的大号从剩余的体积（即，〜0.6M的大号制备在总脂质提取物）P Rocedure乙到NH 2柱，收集的流出级分中的“中性脂质”试管。
与-9 M洗脱大号（3×3M的大号）氯仿：2-丙醇（2:1）到“中性脂质”试管中。
从墨盒中取出“中性脂质”试管。
墨盒用洗涤-9 M 大号（3×3M的大号）2- Pasento乙酸在二乙醚中以除去FFA。
注意：由于洗脱液通常包含会干扰C16：0和C18：0 FA分析的塑料制品干扰材料，因此我们不建议使用该馏分进行FFA测定。

将新的玻璃试管（16 x 125 mm）放在小柱底部，标记为“磷脂”。
与-9 M洗脱大号（3×3M的大号）2.8 Pasento氨的甲醇溶液在玻璃试管中。
从墨盒中取出装有磷脂的玻璃试管。
保留“总脂质”，“中性脂质”和“磷脂”试管以进行衍生。
要继续P Rocedure ê 。

从组织粉样品中提取总FA并将其衍生化
500 MYU添加大号甲基化试剂A至粉碎管含有新鲜煤粉组织的破碎机。
10添加MYU 大号的1毫克/米大号C23：0 FA原液，使用预先润湿的移液器。
注意：此步骤对于定量精度至关重要。应进行预润湿，直到从移液器吸头上没有观察到进一步的液体滴落为止。

使用旋转器混合1小时，在3 - 6 RPM和4℃下
用镊子从管子上拆下破碎机。
将试管中的内容物倒入玻璃试管（13 x 100 mm）中。
500添加MYU 大号的甲基试剂B，涡旋5 S.
注意：使用试管盖进行涡旋和孵育。

在37°C的水浴中孵育1小时。
500添加MYU 大号的甲基试剂C，涡旋5 S.
在37°C的水浴中孵育20分钟。
1M的添加大号的分离试剂，涡旋20 S的
等待相分离完成，然后将上层相转移到新的玻璃试管（13 x 100 mm）中。
向玻璃试管中加入1 ml 水，并涡旋20 s。
等待相分离完成，然后将上层相转移到新的玻璃试管（13 x 100 mm）中。
牛逼继续Ø P Rocedure ˚F 。

衍生化溶解在有机溶剂中的脂质
该样品蒸发衍生化（即，总脂质，中性脂质和磷脂，准备在P Rocedure C）到干燥使用真空蒸发器。
500添加MYU 大号甲基化试剂A的
10添加MYU 大号的1毫克/米大号C23：0 FA原液，使用预先润湿的移液器。
注：牛逼。他一步是至关重要的定量准确预湿，应进行直到不再有液体滴到观察到从枪头。

涡旋20 s。
注意：使用试管盖进行涡旋和孵育。

500添加MYU 大号的甲基试剂B，涡旋5 S.
在37°C的水浴中孵育1小时。
500添加MYU 大号的甲基试剂C，涡旋5 S.
在37°C的水浴中孵育20分钟。
1M的添加大号的分离试剂，涡旋20 S的
等待相分离完成，然后将上层相转移到新的玻璃试管（13 x 100 mm）中。
向试管中加入1 ml 水，并涡旋20 s。
等待相分离完成，然后将上层相转移到新的玻璃试管（13 x 100 mm）中。
继续至P F rocedureF。

净化名人堂
SPE柱体前提柱通过将3M的大号通过它的空调解决方案。
的FAME样本Load制备P Rocedure d或e（〜1M的大号）到筒。
用3 mL洗涤液洗涤。
将玻璃试管（13 x 100毫米）放在墨盒的底部。
用3 mL洗脱溶液洗脱。
一种低FAME如果浓度有望再继续P Rocedure G.否则继续P Rocedure H.

集中FAME
名气解决方案蒸发准备在P .. Rocedure F使用真空蒸发器这个步骤将采取10-15分钟延长蒸发后肺燥将失去短链脂肪酸甲酯，因此应尽量避免。这很重要，对于脂肪酸甲酯短比C16。
重构样品在小体积（例如，20 MYU 大号），二氯甲烷和将其传送到GC样品瓶插入。体积应确定为，GC-FID信号中的线性范围。由于定量不依赖于该重构体积，该体积可以根据样品而变化。

GC-FID分析
将柱温箱，进样器和检测器温度设置为140 °C，240°C和250°C。
将氦气载气的线速度设置为45 cm / s。
标准分析（STD1要STD4和DTA / DPA FAME混合，食谱6-10）通过注入2- MYU 大号体积的分流比为1:25到FAMEWAX柱，烤箱温度程序总结在表1将提供良好的分离效果（图2）。
注意：在C18：1n-9和C18：2n-6的整个数据处理过程中，顺式和反式FAME异构体会合并在一起，因为它们在此方案中未得到解决。这对于仅包含顺式FA异构体的哺乳动物组织样品是可行的。

使用相同的GC方法分析未知样品（图3），可根据样品浓度调整分流比和进样量。

表1. GC 柱箱温度程序

速度（°C / 分钟）

温度（° C）

保持时间（分钟）

0

140.0

0.0

1个

11.0

200.0

0.0

2

3.0

225.0

0.0

3

20.0

240.0

5.0

节目总时间：19.54分钟

D：\重新格式化\ 2020-3-2 \ 1902850--1373吉田佳广249185 \图jpg \图2.jpg

图2. FAME标准品的GC-FID示踪图。显示了Supelco 37组分FAME混合物（黑色）和DTA / DPA FAME混合物（粉红色）的叠加色谱图。可以使用此协议对长于C16的FAME进行定量。步骤蒸发量（P Rocedure G）妥协定量短链脂肪酸甲酯* 18 :. 1N-9和** C18：2N-6的FAME集成并量化为总和的顺式和反式异构体，因为它们没有完全分离。

D：\重新格式化\ 2020-3-2 \ 1902850--1373吉田佳广249185 \图jpg \图3.jpg

3.典型的色谱图小鼠组织样品。总脂质进行提取从〜5毫克E18.5小鼠小肠经布莱-Dyer的方法，40 Pasento有哪些原衍生得到的FAME。重构在20之后MYU 大号二氯甲烷，2 MYU 大号注射到GC色谱柱在分流比为1:25。

资料分析

在Shimadzu GC解决方案软件中，通过填写27个目标FAME的保留时间和校正水平（24个FAME来自Supelco 37- ，准备使用线性校准曲线（曲线拟合类型：“线性”）进行定量的化合物表。组分FAME混合物，以及DTA / DPA FAME混合物中的三个其他FAME）（图4A红色框）可以根据标准分析过程中获得的峰结果填充保留时间可以设置校准水平（浓度）在表2中。
注意：为DTA / DPA FAME混合中的三个附加FAME设置了虚拟（非零）校准级别。设置完成后，只需稍作保留时间修改，就可以将化合物表重新用作模板进行将来的分析。

选项卡乐2 C. Oncentrations连续稀释的标准脂肪酸甲酯。浓度* C18：1N-9 和**Ç 18：2N-6 的FAME是Expre Ssed作为总和的顺式和反式异构体，这些异构体不分离通过GC（参见图2）。

名声

浓度（Myug / M 大号）

标准1

标准2

标准3

标准4

C16：0

600

150

37.5

9.375

C16：1n-7

200

50

12.5

3.125

C17：0

200

50

12.5

3.125

C17：1n-7

200

50

12.5

3.125

C18：0

400

100

25

6.25

C18：1n-9顺式+ C18：1n-9反式*

600

150

37.5

9.375

C18：2n-6顺式+ C18：2n-6反式**

400

100

25

6.25

C18：3n-6

200

50

12.5

3.125

C18：3n-3

200

50

12.5

3.125

C20：0

400

100

25

6.25

C20：1n-9

200

50

12.5

3.125

C20：2n-6

200

50

12.5

3.125

C20：3n-6

200

50

12.5

3.125

C21：0

200

50

12.5

3.125

C20：4n-6

200

50

12.5

3.125

C20：3n-3

200

50

12.5

3.125

C20：5n-3

200

50

12.5

3.125

C22：0

400

100

25

6.25

C22：1n-9

200

50

12.5

3.125

C22：2n-6

200

50

12.5

3.125

C23：0

200

50

12.5

3.125

C24：0

400

100

25

6.25

C22：6n-3

200

50

12.5

3.125

C24：1n-9

200

50

12.5

3.125

使用'force origin'选项处理std1至std4数据文件以生成线性校准曲线，这将强制Y截距为零。检查是否已观察到24个FAME的线性响应（图4A，蓝色框）。
在GC解决方案软件（图4B）中将``曲线拟合类型''从``线性''更改为``手动RF（线性）''，这使用户可以手动修改斜率（响应因子，RF）值。复制C23的RF值：0 FAME相对于DTA / DPA FAME的校准为C23：0 FAME等效（图4B，箭头）由于FID的特性，这种近似是实用且有效的，因为所有FAME的RF值都是类似地，其他FAME的RF值也可以用作有效的近似值。

D：\重新格式化\ 2020-3-2 \ 1902850--1373吉田佳广249185 \图jpg \图4.jpg

图4. 使用Shimadzu GC解决方案软件进行数据处理A. 化合物表（红色框）和校准曲线（蓝色框）在处理标准样品后可以查看校准曲线的线性B.校准DTA和DPA FAME使用C23：0 FAME。将曲线拟合类型更改为``手动RF（线性）''后，可以将C23：0 FAME的响应因子（RF）复制到DTA和DPA FAME的响应因子。

使用准备好的校准设置处理未知样品的数据文件。
检查是否已正确检测到所有峰；否则，请手动纠正或通过修改峰检测参数进行纠正。
将GC解决方案中的原始定量数据复制并粘贴到MS Excel工作表中，然后计算原始样品中的FA绝对量（表3）。由于原始定量数据是GC小瓶中的FAME浓度，因此绝对量可以使用已知量（即10 µg ）加标到样品中的C23：0 FA ，通过比例计算获得样品中FAME的百分比：

然后，可以使用FAME和相应的FA 的分子量将FAME量转换为FA量（请参见补充）：

表3 示例显示了如何从原始定量数据计算FA量的示例。该表以E18.5小鼠小肠的定量结果为例.GC Solution软件的原始定量数据显示了GC小瓶中的FAME浓度（µ g / m l ），可以通过比例计算转换为FAME量（µ g），将样品中C23：0 FAME的量调整为10.396 µ g（相当于10 µg C23：0 FA）。以红色显示的值是不受各种样品影响的常数。当对一部分样品进行FAME衍生化时，需要进一步的比例计算以确定量初始样品中FA的百分比。

脂肪酸

量化数据原始（Myug / M 大号）

样品中的FAME量（微克）

兆瓦（FA）/兆瓦（FAME）

英足总在量的样品（Myug）

C16：0

111.116

4.868

0.948

4.615

C16：1n-7

28.239

1.237

0.948

1.172

C17：0

5.767

0.253

0.951

0.240

C17：1n-7

0.000

0.000

0.950

0.000

C18：0

172.423

7.554

0.953

7.199

C18：1n-9

147.546

6.464

0.953

6.158

C18：2n-6

82.938

3.633

0.952

3.460

C18：3n-6

2.524

0.111

0.952

0.105

C18：3n-3

0.000

0.000

0.952

0.000

C20：0

0.000

0.000

0.957

0.000

C20：1n-9

1.442

0.063

0.957

0.060

C20：2n-6

0.000

0.000

0.957

0.000

C20：3n-6

8.543

0.374

0.956

0.358

C21：0

0.000

0.000

0.959

0.000

C20：4n-6

67.035

2.937

0.956

2.807

C20：3n-3

0.000

0.000

0.956

0.000

C20：5n-3

5.405

0.237

0.956

0.226

C22：0

0.000

0.000

0.960

0.000

C22：1n-9

0.000

0.000

0.960

0.000

C22：2n-6

0.000

0.000

0.960

0.000

C23：0

237.292

10.396

0.962

10.000

C24：0

0.000

0.000

0.963

0.000

C22：6n-3

51.497

2.256

0.959

2.164

C24：1n-9

0.000

0.000

0.963

0.000

C22：4n-6

5.316

0.233

0.960

0.223

C22：5n-6

2.079

0.091

0.959

0.087

C22：5n-3

2.888

0.127

0.959

0.121

进行比例计算确定FA的量以初始样本，金额应乘以2.5（= 1.0 / 0.4），对于准备使用样品P Rocedure C（其中0.4M的大号从该总1.0M的大号分析）。

注意事项

除移液器吸头外，请勿使用用于有机溶剂的塑料器皿（试管和容器），因为从塑料器皿中滤出的成分会导致多种FAME的定量失败。出于同样的原因，请勿从脂肪酸甲基化中转移试剂使用前将其放入塑料容器中。要准确地量取有机溶剂的体积，应在移液器上预先用溶剂浸湿吸管，直到观察不到进一步滴落为止，这需要10个以上的抽吸/喷射周期。

为了安全起见，应在通风橱或通风橱中使用有机溶剂，穿上实验服并戴防护眼镜和手套。

菜谱

氯仿：2-丙醇（2：1，v：v）
注：P Repare 时需要。

测量40男另外大号中氯碱Oform且20μm 大号2-丙醇用玻璃量筒，并混合在一个干净的玻璃瓶

乙醚中2％的乙酸
注意：在需要时进行准备。

60男测量大号使用甲二乙醚量筒
将乙醚转移到干净的玻璃瓶中
1.2M的添加大号醋酸酸与移液器（P1000或P 5000）
Pasento 2.8 一个Mmonia在甲醇
注意：在需要时进行准备。

54男测量大号使用A的甲醇量筒
将甲醇转移到干净的玻璃瓶中
-6 M添加大号28 Pasento氨溶液与的Pipetman （P1000或P 5000）
PBS
稀的5M 大号中PBS（10X浓度）用超纯水的总体积为50微米大号

C23：0 FA（5 mg / ml的储备液和1 mg / ml的工作溶液）
以与上述氯仿：2-丙醇（2：1）混合物类似的方式制备氯仿：甲醇（1：1，v：v）混合物
20毫克称重C23：0 FA粉末使用天平并溶解在4M 大号中氯仿：甲醇（1：1，V：V）在玻璃试管中（16×125毫米）使用预先润湿的移液器
制备1到的Mg / M 大号溶液稀释至1M的大号的5毫克/米大号储备溶液用4M 大号甲醇在玻璃管（16×125毫米）
股票和工作两种解决方案可以保存在-30℃，在2.0-M 大号自动进样器密封螺旋盖瓶
标准FAME混合物（连续稀释）
注：P Repare时，需要和使用预湿皮Pette对于定量准确。

4个空0.5的Label-米升微管的为'STD1'， 'STD2'， 'STD3'和'STD4'。
30地点MYU 大号的Supelco公司37元器件FAME拌入STD1管。输注30 MYU 大号二氯甲烷被调入STD2，STD3和STD4管。使用预先润湿的移液器的准确性。
10转移MYU 大号中STD1进入STD2随着预先润湿的吸管和涡（1/4稀释）。
重复四倍系列稀释：std2→std3（1/16稀释）和std3→std4（1/64稀释）。
将std1到std4转移到玻璃GC样品瓶插入物上，将GC样品瓶标记为'std1'到'std4'。每个样品瓶中FAME标样的浓度列于表2。
注意：请勿将std1至std4试管长时间存放，因为它们会被塑料部件污染。

DTA（C22：4n-6）FAME（〜1 mg / ml 储备溶液）
〜20蒸发MYU 大号的50毫克/米大号解的C22：下4N-6 FAME在乙醇至干温和流的氮气和重新构建用1M 大号中d 。Ichloromethane存储在-30℃下

DPA（C22：5n-6）FAME（〜10 mg / ml 和〜1 mg / ml 储液）
1M的添加大号二氯甲烷要C22：5N-6在玻璃安瓿包含〜10毫克C22：5N-6甲酯和把它转移到干净的玻璃小瓶（〜10毫克/米大号库存）。
用二氯甲烷稀释〜10 mg / ml的储备液以制备〜1 mg / ml的溶液。
储存在-30°C
DPA（C22：5n-3）FAME（〜1 mg / ml储液）
一种蒸发〜100 MYU 大号的10毫克/米大号解的C22：下5N-3 FAME在庚烷至干温和流的氮气和重新构建用1M 大号二氯甲烷

b。储存在-30°C

DTA和DPA FAME组合
一种混合等体积（100 MYU 大号每个）的C22：4N-6，C22：5N-6和C22：5N-6 FAME解于0.5-M 大号微型试管

b。储存在-30°C

注意：此样品瓶中的确切浓度并不严格，因为该溶液仅用于确定保留时间。

致谢

这项工作得到了AMED过敏性疾病和免疫学实用研究项目（过敏性疾病和免疫学研究）19ek0410040h0003（致YK），AMED-CREST 19gm0910011（致HS），AMED-P-CREATE 19cm0106116（致HS）和肝炎基础和临床研究的AMED程序JP19fk0210041（HS）.TS由武田科学基金会（Takeda Science Foundation）资助，该协议源自我们的原始工作（Hashidate-Yoshida et al 。，2015 ）。

竞争利益

部门的脂类组学进行联合研究与岛津公司，部门的脂信号，国家全球卫生中心和医疗进行联合研究与小野制药公司。作者宣称没有其他的竞争利益。

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