材料和试剂

C57BL/6小鼠（购自National Laboratory Animal Center）
灭菌的向日葵种子（SunOpta，目录号：10AF4167）
肉桂（当地面包店）
锯屑（P.J.Murphy Forest Products Corporation，Sani-Chips ）
70％乙醇

设备

装置
该设备（图1）由具有平台基部和具有两个透明有机玻璃闸门（25×20×15cm）的不透明丙烯酸制成。设备一端的等待舱（20×10厘米）通过闸门（15×10厘米）连接到另一端的两个相同大小的选择隔间。

图1.双选挖掘任务的装置
挖坑
将置于每个选择隔室中的挖碗（直径45mm，高25mm）用隐藏在原始或肉桂（2％）风味锯木下的向日葵种子（30-35mg）饵料化。注意：奖励应埋在超过20毫米的锯末上。

图2.挖碗

软件

GraphPad Prism 5.0（GraphPad软件）用于生成图表并分析试验的数据以获取和重新学习试验。小于0.05的p值被认为是统计学显着的。

程序

注意：

该任务中使用的程序从用于研究小鼠的注意力集中转移的程序（Colacicco等人，2002，Garner等人，2006）修改。
一般来说，这种双选择挖掘测试包括3天适应期，1天学习期和1天反转学习期。
在开始任务之前，然后在整个实验中，将小鼠单独圈养在它们的家笼中，并且限制食物（每天1.5-2g），以将其体重降低至自由进食的85-90％体重。
1. 3天适应期
  为了确保受试小鼠在放置在每个奖励室中的挖碗中挖掘向日葵种子的奖励，小鼠必须适应充满原始或肉桂风味锯木屑的诱饵碗。为此，小鼠被剥夺食物22小时，然后允许每天访问湿捣碎的食物每天2小时。喂食后，用锯屑和带有向日葵种子的饵料的挖碗被放置在他们的家笼中过夜，使得可以训练小鼠习惯实验工具，并且通过在碗中挖入来获得奖励。此期间将执行以下步骤。
  1. 第1天
    1. 在22小时食物剥夺之后，每天喂食小鼠捣碎和水分食物（1.5-2g）2小时。
    2. 小鼠消耗水分食物后，放置一个挖坑碗诱饵向日葵种子（30-35毫克）隐藏在原始风味的锯木屑下面进入家笼，并恢复22小时的食物剥夺。
  2. 第2天（视频1）
    1. 小鼠被放入等候室。
    2. 一旦鼠标没有面对或触摸门，两个断头台门同时提起，以允许鼠标探索测试盒子10分钟。
    3. 10分钟后过期，返回鼠标返回到等待室并立即降低门。与此同时，在每个选择的隔间放置一个原始锯木屑填充的诱饵碗同时。
    4. 重新打开两门，小鼠然后给两个连续试验与无限自由访问两个诱饵碗测试装置直到找到两个奖励。一旦老鼠检索a 奖励，他们被允许消费它，然后才返回等候室。
    5. 当试验完成后，将小鼠送回他们的家笼。饲料小鼠与湿捣碎食品（1.5-2克）2小时。
    6. 2小时后，放入2％肉桂风味的锯屑诱饵碗进入家笼子过夜，恢复22小时的食物剥夺。
      注意：可以制备2％肉桂味的锯屑通过均匀地混合锯末和肉桂在ziplock袋。中准备，改变手套后加重或接触肉桂以避免原始和肉桂风味之间的交叉污染锯末。
      
      视频1.两选择挖掘 - 第2天 - 习惯时期
  3. 第3天：几乎和第2天相同，只是原来的锯末填充的诱饵碗由2％肉桂风味代替锯末填充的诱饵碗在选择室。
    1. 之后 22小时食物剥夺，将小鼠放入等候室，然后通过10分钟的自由探索测试箱
    2. 立即在探索之后，小鼠被自由地连续两次试验访问两个2％肉桂风味的锯屑填充的诱饵碗定位在选择隔间，直到两个奖励被检索和消耗
    3. 将小鼠回到笼子里，喂食限制食物。后一小时喂食，将原来锯木屑填充的诱饵碗放入他们的笼子过夜，恢复食物剥夺。三天后习惯，小鼠应该训练习惯于任务结构并通过在食物碗中快速找到食物的奖励。
2. 1天学习期
  在这个时期，小鼠训练得知，装满原始味的锯木屑的碗被诱饵（正确）和2％肉桂风味锯木屑是不挨打的（不正确）。这种学习测试包括训练测试（前四个测试）和测试试验（从试验5开始）。
  1. 第4天（视频2）
    
    视频2.双向选择挖掘 - 第4天学习期
    1. 将挖碗放在选择的隔间：一个是原始的锯末填充的诱饵; 另一种是肉桂风味的锯末填充不羁。
      注意：诱饵和不ited碗位于在每个选择的区室（左对右）随机。每个鼠标，诱饵碗应该呈现在左右手同时防止空间提示鼠标关于哪个碗是诱饵。在整个这段时间，诱饵碗不应该被提出相同的选择室连续三次以上。
    2. 食物剥夺后，将小鼠放在等候室，然后同时打开闸门开始训练试验
    3. 在训练试验中，小鼠接受前四个试验，其中他们被允许自由地在两个碗里挖。如果第一次发生在诱饵碗中，允许小鼠检索和消费奖励，然后挖在另一个unbaited碗。如果第一次挖发生在未被褥的碗，记录不正确的选择和老鼠仍然允许从另一个诱饵碗中取回奖励注意：只有用爪子或鼻子从碗中移动锯屑可以定义为挖掘响应。简单地接触或嗅探锯末或由小鼠执行的碗不能被识别为挖掘选择。
    4. 一个训练试验完成后，小鼠回到等待隔间和地方到他们的家庭笼子等待下试验。同时，清洁设备的基座，墙壁和门彻底用乙醇，以确保没有气味残留（乙醇应该用于在所有试验之间仔细清洁此设备）注意：在此任务中，测试不超过四只小鼠作为一组，以避免下次试验等待时间过长。
    5. 四个训练试验完成后，对小鼠进行从试验5起的测试试验，其中允许小鼠挖入一碗只。如果老鼠先挖了原来的气味锯屑填充诱饵碗（正确），他们被允许消耗奖励。试用并且鼠标返回到等待室后挖掘时，老鼠开始挖肉桂的气味锯末填充的不褥碗（不正确）。一次测试试验完成后，鼠标会回到他的笼子里，等待下一个试验。
      注意：如果试用开始后5分钟没有选择，则试用期结束并标记为不完整。
    6. 鼠标选择首先挖的碗（正确/不正确）。测试试验重复多次。一旦小鼠符合六个连续正确试验的标准水平测试结束。达到标准所需的试验次数是已记录。
    7. 测试试验完成后，返回小鼠到其家笼，并给小鼠限制性食物颗粒（1.5-2 g）过夜。
3. 1天反转学习期
  第二天，将小鼠进行逆转学习期，其中将奖励切换到填充有2％肉桂风味锯木屑的碗中。小鼠再次首先进行训练试验（前四个试验）以重新学习肉桂气味锯屑填充碗是正确的，然后允许立即选择一个碗只是为了测试他们的认知灵活性在测试试验（从试验5起）。
  1. 第5天：与第4天（学习期）相同，除了奖励是掩埋在2％肉桂味锯屑下，意味着碗里充满了 2％肉桂风味的锯屑被诱饵（正确）和碗填充与原始风味的锯木屑是不羁的（不正确）。
    1. 地点碗，一个是肉桂味（诱饵/正确），另一个是原始气味（未ited /不正确），在选择隔间
    2. 在前四个试验（训练试验）中，允许小鼠在诱饵和非诱饵碗中进行挖掘
    3. 训练后，从试验5开始测试试验，其中允许小鼠仅在一个碗中挖。
    4. 一旦小鼠达到6的标准，测试终止连续正确试验。记录需要满足的试验次数标准。

食谱

调味锯末
2％肉桂

致谢

此协议改编自参考文献中列出的以前的作品。

参考文献

Birrell，J.M。和Brown，V.J。（2000）。内侧额叶皮质介导大鼠的知觉注意集移位。 J Neurosci 20（11）：4320-4324
Colacicco，G.，Welzl，H.，Lipp，H.P.and Wurbel，H。（2002）。小鼠的注意力转移：大鼠范例的修改，以及应变依赖性变异的证据。 Behav Brain Res 132（1）：95-102。
Garner，J.P.，Thogerson，C.M.，Würbel，H.，Murray，J.D.and Mench，J.A。（2006）。动物神经心理学：验证小鼠的内部维度外形集移位任务。 Behav Brain Res 173（1）：53-61。
Huang，T.N.，Chuang，H.C.，Chou，W.H.，Chen，C.Y.，Wang，H.F.，Chou，S.J.and Hsueh，Y.P.（2014）。 Tbr1 haploinsufficiency损害杏仁核轴突预测和结果的认知异常。 Nat Neurosci 17（2）：240-247。