Alternaria brassicicola inoculation on Arabidopsis

1.      从-80度冰箱取出20%甘油保存的Alternaria brassicicola菌块，接到V8培养基平板上培养；

2.      培养7点后，刮一小片带有菌丝和孢子的培养基，转接到一块新的V8培养基平板上；（最好不要用从-80度冰箱拿出来的第一代菌，第二代到第12代的菌都可以用）

3.      选取适量培养14d左右的Alternaria brassicicola于50ml离心管中

4.      用双蒸水配制0.1% non-fat milk，加入适量于离心管中，通过涡旋仪震荡将孢子洗脱，并用纱布过滤，收集孢子过滤液；

5.      摇匀菌液后吸取适量菌液点在“血球计数板”上，进行镜检计数，然后将菌液稀释至2.5*10⁵个孢子/ml（可适量提高）；

6.      将菌液倒入小烧杯中放在磁力搅拌器上混匀备用；（由于孢子容易沉底，在吸取菌液接种植物时，搅拌器不能停）

7.      选择生长35d左右的新鲜拟南芥叶片放入保湿环境良好的容器中，各吸取8ul菌液分别点在叶片左边的中央，然后盖上塑料透明盖子，用透明胶带封闭容器放入拟南芥培养箱（22 °Ｃ，12小时光照/12小时黑暗）中5-7d后观察;

8.      测量病斑的直接（横向），并拍照确定表型；